Главная Связаться с администрацией
Логин:  
Пароль:
Беременность Рожаем После родов Карьерный рост Забота о здоровье Есть вопрос?
Самые новые статьи
Наши разделы

Получение моноклональных антител (гибридомная технология)

Получение моноклональных антител (гибридомная технология)

Для использования большинства иммунологических и серо-логических методов исследования необходимо иметь стандартные преврати антител. Основные требования к этим препаратам - специфичность, стабильность, достаточное содержание антител. Сложность получения таких препаратов путем иммунизации животных связана с гетерогенностью получаемых при этом антител. Каждый природный антиген многокомпонентен, и к каждому его эпитопу формируются отдельные клоны антителообразующих клеток, что обуславливает большое разнообразие продуцируемых антител. Более того, к одной антигенной детерминанте может образоваться множество вариантов молекул антител. Таким образом, антитела, получаемые от разных особей одного вида, иммунизированных одним антигенным препаратом, не полностью идентичны.

Получить абсолютно однородные антитела можно, только используя клетки - антителопродуценты одного клона - потомков одной специализированной клетки. Решить задачу, используя специально отобранные лимфоциты иммунного человека или животного, невозможно, поскольку срок жизни каждого клона клеток ограничен и количество продуцируемых антител очень невелико.

Положение коренным образом изменилось после того, как Г. Кёлер и Ц. Милштейн осуществили гибридизацию антителообразующих клеток, полученных от животного, с культивируемыми в пробирке клетками злокачественной опухоли - В-клеточной плазмацитомы. Полученные при этом гибридные клетки обладали свойствами обеих родительских клеток: способностью продуцировать антитела и способностью к неограниченному размножению вне организма.

Таким образом, были получены теоретически «бессмертные» клоны гибридных клеток (гибридомы), способные к образованию неограниченного количества однородных продуктов одного клона клеток - моноклональных антител.

Процедура получения гибридомных клеток и моноклональных антител сводится к следующему. Животное (чаще мышь) иммунизируют нужным антигенным материалом. После того как началась продукция антител, удаляют селезенку, и из нее извлекают клетки, среди которых имеются антителообразующие В-лимфоциты. Все клетки смешивают со специально отобранными клетками культуры В-миеломы, дефектными по ферменту метаболизирующему гипок-сантин. К смеси клеток добавляют вещество, повреждающее оболочки клеток и способствующее их слиянию между собой (полиэтилен-гликоль, лизолецитин или вирус Сендай). В результате образуются разнообразные гибридные клетки, а часть клеток остается негибридизированной. Для того чтобы выделить только гибридные клетки, полученную смесь культивируют на специальной среде ГАТ (содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимидин), в которой не могут жить родительские клетки. В среде остаются живыми только гибридные клетки, но с разными свойствами, так как в селезенке иммунизированного животного наряду с антителообразующими клетками, которые было необходимо получить, содержится много других лимфоцитов. Поэтому следующим этапом является отбор гибридных клеток, способных продуцировать необходимые антитела. Для этого взвесь полученных клеток разбавляют питательной средой и помещают в лунки специальных панелей так, чтобы в каждую лунку попало по одной клетке. Через определенное время определяют антитела, образовавшиеся в каждой лунке, и находят те клетки, которые можно использовать как родоначальников клона гибридомных клеток.

Отобранные гибридомные клетки можно культивировать in vitro или in vivo, получая необходимые количества клеток и моноклональных антител. Гибридомные клетки могут храниться в замороженном состоянии, пересылаться из лаборатории в лабораторию. В ходе приготовления гибридомных клеток может быть выделено несколько клонов клеток, продуцирующих антитела к разным эпитопам антигена, что позволяет провести его разносторонний анализ.

Моноклональные антитела могут использоваться для разных практических целей:

  • для идентификации клеток - выявления Т- и В-лимфоцитов и других клеток, определения их свойств;

  • для осуществления современных радиоиммунных, иммуноферментных и иммунолюминесцентных методов выявления антигенов и антител;

  • для определения локализации антигенов в организме и доставки к ним (например, в опухоль) лекарственных веществ, присоединенных к антителам;

  • для приготовления иммуносорбентов, позволяющих выделить ели удалить из организма антигены или клетки данной специфичности.


Источник

Похожие статьи на сайте
Свежий номер568 Образ Жизни » ОКТЯБРЬ 2012 » Дети - их выбор Дети - их выбор! Когда одна моя приятельница сообщила, что беременна, я искренне за нее порадовалась.
Тренер о раннем плаванииОт редакции: Сегодня у нас в гостях Тамара Анохина, мастер спорта СССР по плаванию, выпускница Санкт-Петербургского института физической культуры по специализации плавание.
Ландшафтный дизайн садового участка.01 Окт Для того, чтобы сад покрыли облака цветов, которые красовались бы в свете теплого солнышка, в свободные дни вы можете вырастить рассаду самостоятельно.
Печем вишневый пирог
Нет, наверное, ни одного человека, который не любил бы вишневые пироги. Рецептов приготовления таких пирогов достаточно много.
Геморрой у женщин
Геморрой у женщин — причины возникновения и лечение Вопрос о том, бывает ли у женщин геморрой, имеет конкретный однозначный ответ.
Змеиные укусы
Укус змеи Хотя большинство змей относится к числу не ядовитых, змеиные укусы почти всегда болезненны и могут вызвать инфекцию.
Детское новогоднее меню
01.12.2011 Детский праздник, а также спокойный взрослый праздник невозможен без сытых детей. Если Вам приходилось хоть раз встречаться зависимым от еды мужчиной, то умножьте это на десять, уберите хоть какие-то рамки приличий – и с удовольствием представьте, во что превратится Ваш Новый Год, если Вы вовремя не покормите детей.
Хирургическое торакальное отделение
Хирургическое торакальное отделение Хирургическое торакальное отделение Омской областной клинической больницы (ГУЗОО ОКБ) развернуто на 30 коек.
И урологически
Беременность и урологические заболевания Беременность и урологические заболевания Остановимся на некоторых частных вопросах, относящихся к урологическим заболеваниям у женщины, готовящейся стать матерью.
Партнерские роды
Что же такое партнерские роды Это роды с помощником, если точнее это когда в родильном зале помимо врачей и акушеров находится близкий человек, который помогает роженице.
Как выглядит базалиома на шее, формы, диагностика, лечение
Главная Дерматология Новообразования кожи Как выглядит базалиома на шее, формы, диагностика, лечение Как выглядит базалиома на шее, формы, диагностика, лечение Как выглядит базалиома на шее см.
Мы и наши сны: загадки ночи
Сны могут быть приятными или пугающими, вызывать много вопросов и желание разобраться в них. К одним они приходят каждую ночь, другие жалуются, что совсем их не помнят.


© 2009-2013 Все права защищены
Ника всегда найдет ответ на ваш вопрос!
При копировании материалов активная прямая гиперссылка на главную страницу веб-сайта http://nika-s.kiev.ua/ обязательна.